【簡(jiǎn)介】
試劑盒由抗原包被板、羊抗豬酶標(biāo)二抗及其它試劑組成，應(yīng)用間接ELISA檢測(cè)豬血清中抗細(xì)小病毒抗體。
【用途】
用于檢測(cè)豬血清中細(xì)小病毒抗體，適用于豬場(chǎng)細(xì)小病疫苗免疫狀況的評(píng)價(jià)以及感染豬的血清學(xué)診斷。
【原理】
本試劑盒是采用純化的細(xì)小抗原包被微孔板，在試驗(yàn)中，加入稀釋的對(duì)照血清和待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有抗細(xì)小病毒的特異性抗體，則將與包被板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入HF溶液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀630nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的OD值。
【試劑盒主要成分】
1 抗原包被板 2塊 （96孔/板）
2 陰性對(duì)照（藍(lán)色蓋子） 1管 （1ml/管）
3 陽(yáng)性對(duì)照（紅色蓋子） 1管 （1ml/管）
4 羊抗豬酶標(biāo)二抗（藍(lán)色蓋子） 1瓶 （20ml/瓶）
5 20倍濃縮洗滌液（白色蓋子） 1瓶 （30ml/瓶）
6 底物液A（紅色蓋子） 1瓶 （10ml/瓶）
7 底物液B（黑色蓋子） 1瓶 （10ml/瓶）
8 終止液（藍(lán)色蓋子） 1瓶 （10ml/瓶）
9 樣品稀釋液（黃色蓋子） 1瓶 （50ml/瓶）
10 血清稀釋板 2塊 （96孔/板）
11 說(shuō)明書 1張
【樣品制備】
取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血。
【洗滌液配制】
使用前，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右），并搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解（在37℃水中加熱5~10分鐘），然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋（例如：每板用20ml濃縮液加上380ml水），稀釋好的洗滌液在2~8℃可以存放7天。
【樣品和對(duì)照稀釋】
樣品稀釋：在血清稀釋板中按1:40的體積稀釋待檢血清樣品（195μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清樣品）。
對(duì)照稀釋：在血清稀釋板中按1:4分別稀釋陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照（180μl樣品稀釋液中加60μl對(duì)照血清）。
【注意事項(xiàng)】
1 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用后放回2~8℃。
2 不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑交叉污染。
3 不要用口移液。
4 底物液B不要暴露于強(qiáng)光，避免接觸氧化劑。
5 未使用的抗原包被板切記不要撕開(kāi)上面的封口膜。
6 待檢血清樣品數(shù)量較多時(shí)，應(yīng)先使用血清稀釋板稀釋完所有要檢測(cè)血清，再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到檢測(cè)板，使反應(yīng)時(shí)間一致。
7 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。
8 嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書可以獲得的結(jié)果。
【操作步驟】
1 取抗原包被板（根據(jù)樣品多少，可拆開(kāi)分次使用），分別將稀釋好的待檢血清和對(duì)照各取100μl加入到抗原包被板孔中，待檢樣品做1孔，陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30分鐘。
2 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μl,靜置3分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共計(jì)洗滌5次。
3 每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μl,置37℃溫育30分鐘。
4 洗滌5次， 方法同2.切記每次在干凈吸水紙上拍干。
5 每孔先加底物液A一滴（50?l）、再加底物液B一滴（50?l），混勻，室溫（18℃~25℃）避光顯色10分鐘。
6 每孔加終止液一滴（50μl），10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果（測(cè)定前在震蕩器上輕輕震動(dòng)一下）。
【結(jié)果判定】 在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD630nm值。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630nm值≥0.6,陰性對(duì)照孔平均OD630nm值必須<0.3.
樣品OD630nm值≥0.4,判為陽(yáng)性；樣品OD630nm值<0.4,判為陰性。
注意：用620~650納米波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果均有效。
【貯 存】 2~8℃避光保存
【有 效 期】 10個(gè)月
【生產(chǎn)企業(yè)】 武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司